Cómo hacer un tampón de electroforesis TBE 10X

TBE y TAE se usan como amortiguadores en biología molecular, principalmente para la electroforesis de ácidos nucleicos. Los tampones Tris se usan en condiciones de pH ligeramente básicas, como para la electroforesis de ADN, porque esto mantiene el ADN soluble en la solución y lo desprotona para que sea atraído hacia el electrodo positivo y migre a través de un gel. El EDTA es un ingrediente en la solución porque este agente quelante común protege los ácidos nucleicos de la degradación por enzimas. El EDTA quela los cationes divalentes que son cofactores de las nucleasas que pueden contaminar la muestra. Sin embargo, dado que el catión de magnesio es un cofactor para la ADN polimerasa y las enzimas de restricción, la concentración de EDTA se mantiene deliberadamente baja (alrededor de una concentración de 1 mM).

10X TBE Electroforesis Buffer Materials

• 108 g de base Tris [tris (hidroximetil) aminometano]
• 55 g de ácido bórico
• 7,5 g de EDTA, sal disódica
• Agua desionizada

Preparación para el 10X TBE Electroforesis Buffer

1. Disolver el Tris, el ácido bórico y el EDTA en 800 ml de agua desionizada..
2. Diluya el tampón a 1 L. Los grumos blancos no disueltos pueden disolverse colocando la botella de solución en un baño de agua caliente. Una barra de agitación magnética puede ayudar al proceso.

No necesita esterilizar la solución. Aunque la precipitación puede ocurrir después de un período de tiempo, la solución madre todavía es utilizable. Puede ajustar el pH utilizando un medidor de pH y la adición gota a gota de ácido clorhídrico concentrado (HCl). Está bien almacenar el tampón TBE a temperatura ambiente, aunque es posible que desee filtrar la solución de reserva a través de un filtro de 0,22 micras para eliminar las partículas que favorecerían la precipitación.

Almacenamiento de tampón de electroforesis 10X TBE

Guarde la botella de solución tampón 10X a temperatura ambiente. La refrigeración acelerará la precipitación..

Usando 10X TBE Electroforesis Buffer

La solución se diluye antes de su uso. Diluir 100 ml de 10X stock a 1 L con agua desionizada..

Receta 5X TBE Stock Solution

La ventaja de la solución 5X es que es menos probable que precipite.

• 54 g de base Tris (Trizma)
• 27,5 gramos de ácido bórico
• 20 ml de solución de EDTA 0,5 M
• Agua desionizada

Preparación

1. Disuelva la base Tris y el ácido bórico en la solución de EDTA.
2. Ajuste el pH de la solución a 8.3 usando HCl concentrado.
3. Diluya la solución con agua desionizada para hacer 1 litro de solución madre 5X. La solución también se puede diluir a 1X o 0.5X para electroforesis.

El uso accidental de una solución stock 5X o 10X le dará malos resultados porque se generará la mayor cantidad de calor. Además de darle una resolución deficiente, la muestra puede estar dañada.

0.5X TBA Buffer Recipe

• Solución stock 5X TBE
• Agua desionizada destilada

Preparación

Agregue 100 ml de la solución 5X TBE a 900 ml de agua desionizada destilada. Mezcle bien antes de usar.

Limitaciones

Aunque TBE y TAE son amortiguadores de electroforesis comunes, existen otras opciones para soluciones conductoras de baja molaridad, incluido el amortiguador de borato de litio y el amortiguador de borato de sodio. El problema con TBE y TAE es que los amortiguadores basados ​​en Tris limitan el campo eléctrico que se puede usar en la electroforesis porque una carga excesiva provoca una temperatura desbocada.